传统保护剂对细胞都有一定的毒害作用，研究人员发现了具有抗冻作用的新型保护剂：抗冻蛋白(AFP)[孔一6]和冰结合蛋白(IBF)[2卜29]。AFPs具有与冰晶结构相似的性质并且可以降低冰晶以针状沿中心轴生长的速度，IBF则可以抑制再结晶，从而保护细胞膜[3引。
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目前广泛使用的极地鱼抗冻蛋白由于价格昂贵受到限制，而从微生物中提取抗冻蛋白可大大降低成本，其将成为研究的热点并取代鱼蛋白而占有市场。
虽然液氮超低温保存体系的研究已经较为深入、成熟，并且为自然资源的长期保存做出了重大的贡献，但是仍然存在一些问题需要引起人们的关注。
(1)经常使用的液氮是未经灭菌的，将装有材料的冷冻管浸入到液氮中时，液氮可能渗透到管中引起微生物污染[3嵋;
(2)微生物长期保存不仅要保证菌株的生理性状还要保证遗传信息的完整性，保藏过程中仅以活性指标判断微生物是否保藏完好有些片面。StoychevaE3z]研究发现，将酵母菌Saccharornycescerevisi投入到液氮中进行快速冷冻无突变被诱发。
然而在4℃下预冻2 h，然后一10℃下冷冻1 h，再在一20℃下放置16 h的逐级降温过程中易诱导线粒体rho一突变体生成。
同时，StamenovaE33]也发现慢速冷冻和逐级冷冻下，线粒体氧化磷酸化、超氧化物阴离子的积累导致基因组Tyl转座子转移。然而研究者往往只重视存活率和生理生化性能的稳定，却忽视了对基因组变化及完整性的检测。
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随着分子生物学的发展，利用PCR、AFLP、RFLP等分子标记技术检查基因组变化已经成为可能。因此使用生理生化稳定性和基因组完整性这个双重指标评价一个保存方案的可行性是必要的。
