1.研究对象及分组：选取2010年1月至2014年9月在生殖中心因男方梗阻性无精子症行icsi助孕者，共214个周期，其中采用冷冻复苏睾丸精子行icsi助孕107个周期(冻精复苏组)，采用新鲜睾丸精子行icsi助孕107个周期(新鲜精子组)。纳入标准：第1周期行icsi治疗、长方案超排卵、夫妇双方染色体核型分析均正常者。排除标准：女方子宫内膜异位症、子宫肌瘤、子宫畸形、卵巢功能衰竭等。梗阻性无精子症确诊依据：至少3次射出精液离心沉淀后未见精子，诊断性睾丸活检可见成熟精子。
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2.睾丸穿刺取精：常规消毒铺巾，利多卡因局部麻醉，用带侧孔的睾丸穿刺针经皮睾丸穿刺，稍拔出针芯，挤压睾丸，再插入针芯，然后连穿刺针一起拔出，从穿刺针侧孔挑出睾丸组织，置于含10%人血清白蛋白的人输卵管培养液中，用2只1ml注射器针头划破曲细精管，倒置显微镜下观察，吹打混匀后直接离心处理。
3.精子冷冻：精子冷冻保护剂置室温平衡30min;将经处理后含有精子的悬液与精子冷冻保护剂以1：1比例混匀，移入精子保存管进行分装，室温平衡10min;悬吊于液氮罐内距液氮面5cm，10min后将精子保存管放入液氮长期保存。
4.精子复苏：从液氮中取出保存精液的冷冻管，在室温中放置30min;加入等量含10%sss的HtF培养液，混匀后进行洗涤离心;最后在沉淀物中加入含10%sss的HtF培养液混匀待用。
5.卵母细胞获取、icsi及胚胎移植：超促排卵均采用黄体中期启动的长方案，当直径≥20mm的卵泡≥2个时，注射HcG10000U，36H后行阴道B超引导下穿刺取卵术。取卵后4～6H选取成熟卵母细胞(mii期)行icsi操作。取卵后第3天选择最优的1～3枚胚胎移植。
6.判断指标：正常受精：icsi后16～17H观察受精情况，以双原核为正常受精;卵裂率：icsi后40～41H观察卵裂情况，并计算卵裂球比例;优质胚胎：以卵裂球大小均匀，细胞饱满，碎片<5%的i级胚胎和碎片≤20%的Ⅱ级胚胎为优质胚胎;可利用胚胎：所有移植及冷冻的胚胎;临床妊娠：移植后14D查血β-HcG，确定是否生化妊娠，若为阳性，2周后B超检查提示宫腔内或宫外见孕囊及胎心搏动者为临床妊娠。
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7.统计学分析：采用sPss13.0软件进行数据分析，结果以均数±标准差(珚x±s)表示，组间比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
