首先说冻存液配方，常用的配方一般是两种—— 90% FCS+10% DMSO 或 70% 培养基 + 20% FCS+10% DMSO。前一种较贵，而且后一种冻存效果也不错，因此本人一般选用第二种配方。对于比较脆弱的细胞则选用前一种冻存液。
气相液氮罐
冻存步骤比较简单，前期处理同细胞传代，只是在离心后是直接吸取上清，用手拍打离心管底部，加入适量冻存液使细胞完全悬浮后分装于冻存管。制后先将冻存管放入4℃ 冰箱，约 40 min。 接着置于-20℃ 冰箱，约60 min。置于 -80℃ 超低温冰箱中放置过夜。 最后置于液氮罐中长期保存。 同时做好冻存记录，在自己的笔记本和冻存记录本上均要记录。
注意事项
1. 使用 DMSO 前，不需要进行高压灭菌，它本身就有灭菌的作用。高压灭菌反而会破坏它的分子结构，以至于降低冷冻保护效果。
2. 冻存时要选处于对数生长期的细胞，这样效果要好很多。
3. 不宜将冻存细胞放置在 0℃～-60℃ 这一温度范围内过久，低温损伤主要发生在这一温度区内，是「危险温区」。
4. 注意定期检查液氮罐内液氮量，及时添加。
5. 冻存液中的培养基要与培养时相同，避免细胞由于环境突然改变而死亡，在冻存管上也要标明培养基种类。
6. 冻存液不要预热。
7. 程序冻存盒非常好用，省事省时效果还好，强烈推荐冻存使用冻存盒。
气相液氮罐
细胞复苏的原则是快速融化：必须将冻存在 -196℃ 液氮中的细胞快速融化至 37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。
具体步骤
1. 将水浴锅预热至 40℃。
2. 用 75% 酒精擦拭紫外线照射 30 min 的超净工作台台面。
3. 在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等等。
4. 根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的编号。
5. 从液氮罐中取出细胞盒，取出所需的细胞，同时核对管外的编号。
6. 迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻，并要不断的摇动，使管中的液体迅速融化。
7. 约 1-2 min 后冻存管内液体完全溶解，取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁。
8. 平衡后，放入离心机中 3000 r/min 离心 3 min。
9. 吸弃上清液。
10. 向冻存管内加入1 ml培养液，吹打制成细胞悬液。
11. 最后将细胞悬液分装入培养瓶内，将培养瓶放入37℃ 和 5% CO2 的培养箱内 12-24 小时后换液继续培养培养，换液的时间由细胞情况而定。
注意事项
复苏时选用的培养基要符合冻存管上标明的培养基。操作人员应戴防护面罩及手套，防止冷冻管可能爆裂之伤害。自液氮或干冰容器中取出冷冻管，检查盖子是否旋紧，由于热胀冷缩过程，此时盖子易松掉。
